用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值比擬較,從而判斷標本中牛支原體的存在與否。此外,3種試劑盒對牛傳染性肋膜肺炎尺度血清(PS2)的檢測結果顯示HVRI試劑盒和Kit 1均為為陰性,Kit 2為陽性。因此,HVRI試劑盒與Kit 1更適于M.bovis檢測和開展流行病學調查。用純化的牛支原體抗體包被微孔板,制成固相抗體,ELISA試劑盒可與樣品中支原體相結合,經洗滌除去未結合的抗體和其他成分后再與HRP標記的支原體抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經由*洗滌后加底物TMB顯色。
牛支原體酶聯免疫分析試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫法(ELISA)測定標本中牛支原體。一致性檢修結果顯示:HVRI試劑盒與Kit 1的一致性較高;Kit 2與HVRI試劑盒、Kit 2與Kit 1有中度的一致性。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,ELISA試劑盒并在酸的作用下轉化成*的。結果表明:本實驗室制備的HVRI試劑盒與商品化試劑盒Kit 1的檢測結果和綜合檢測結果符合率分別達到92%和96%;而商品化試劑盒Kit 2的檢測結果與綜合檢測結果符合率僅為74.67%。
ELISA試劑盒為比較3種抗牛支原體(M.bovis)血清抗體的ELISA試劑盒檢測效果,本實驗應用3種檢測M.bovis血清抗體ELISA診斷試劑盒對38份陽性樣品(天然感染19份,人工感染18份)和37份陰性樣品進行檢測。